bhk-21细胞| bhk-21细胞系 培养步骤
产品名称：bhk-21细胞
中文名称：仓鼠肾成纤维细胞；bhk-21
规格：t25
形态特征：成纤维细胞样
生长状态：贴壁生长
特征特性：该细胞系是于1961年由macpherson ia、stoker mgp建系，源自5只未辨性别的1天龄仓鼠肾；可作为转化宿主；oie组织将该细胞用于狂犬病的诊断。
培养条件：dmem(高糖）+10%fbs（gibco）（推荐hakata优等胎牛血清 货号：hn-fbs-500）
传代方法：1：2传代，每周换液1~2次。
冻存条件：hakata ® 无血清细胞冻存液 货号：h-w-100 规格：100ml
支原体检测：阴性
使用权限：a类
参考文献：
供应商：上海慧颖生物科技有限公司
复苏周期：10个工作日左右
培养步骤：
1）复苏细胞：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5ml培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6ml完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%trypsin-0.53mm edta）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000rpm条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
ps：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至t25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000rpm条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000rpm条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及dmso，冻存比例为90%fbs+10%dmso。
ps：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至t25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
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